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基礎信息Product information
產品名稱:

CD3,CD4,CD8,豬T淋巴細胞亞群ELISA試劑盒說明書

產品型號:

廠商性質:生產廠家

所在地:上海市

更新時間:2017-12-01

產品簡介:

CD3,CD4,CD8,豬T淋巴細胞亞群ELISA試劑盒說明書用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中豬T淋巴細胞亞群(CD3,CD4,CD8)的含量。

產品特性Product characteristics
品牌BIM供貨周期現貨

CD3,CD4,CD8,豬T淋巴細胞亞群ELISA試劑盒說明書

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中豬T淋巴細胞亞群(CD3,CD4,CD8)的含量。

l 有效期:6個月

l 保存條件:2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被豬T淋巴細胞亞群(CD3,CD4,CD8)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬T淋巴細胞亞群(CD3,CD4,CD8)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

操作方法

以雙抗體夾心法為例展示:

1、雙抗體夾心法檢測抗原         

操作步驟如下:

1)將特異性抗體與固相載體結合,形成固相抗體。洗滌除去尚未結

合的抗體及一些雜質。

2)加入待測標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。

3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。

4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如 HBeAgHBsAghCG AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標所使用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測。

在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現象被為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中 HBsAgAFP 和尿液 hCG 等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。

客戶收集樣品要求

  ·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

  ·檢測的樣本為細胞培養上清、人和動物的血清、血漿。

  ·樣本收集后應立即-20℃保存,若長期保存應-70℃。

  ·樣本量的要求:若一個指標做復孔檢測應不少于250ul,做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

   ·客戶的樣本收集后,立即按要求保存,切忌反復凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與溝通確認。

CD3,CD4,CD8,豬T淋巴細胞亞群ELISA試劑盒說明書組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 7 終止液 6ml×1

2 酶標試劑 6ml×1 8 標準品(480ng/L0.5ml×1

3 酶標包被板 12 孔×8 9 標準品稀釋液 1.5ml×1

4 樣品稀釋液 6ml×1 10 說明書 1

5 顯色劑A 6ml×1 11 封板膜 2

6 顯色劑B 6ml×1/12 密封袋 1

Elisa試劑盒標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

120ng/L 4 號標準品 150μl 5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

60ng/L 3 號標準品 150μl 4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

30ng/L 2 號標準品 150μl 3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

15ng/L 1 號標準品 150μl 2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。

咨詢和訂購的方法

  1.可來電向我們直接咨詢及訂購。

  2.可點擊本頁上方“交談”向我司在線人員咨詢及訂購。

  3.可在本頁下方留言欄內留言,我們會在半個工作日內您

公司是中國ELISA試劑盒的專業的銷售平臺和貿易中心,公司的ELISA試劑盒現全部實行“*優惠”,望新老客戶前來購買。

 

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