產品型號：VEGF

廠商性質：生產廠家

所在地：上海市

更新時間：2016-06-06

產品簡介：

一、產品簡介：

【產品名稱】：雞血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒 

產品規格：96T 48T

產品品牌：滬鼎生物 TSZ

樣品類型  血清、血漿、細胞培養上清等樣品類型

檢測方法  酶聯免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性

交叉反應  由于當前的酶聯免疫科學技術和知識有限，現有技術不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此，交叉反應可能仍然存在

樣 本 量  50-100 μL

實驗時間  1–4.5h

儲存條件  2-8°C

儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達1個月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實驗效果更佳）。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕

有 效 期  6 months

使用優點  ELISA試劑盒可特異性定量測定疾病相關蛋白，包括細胞因子、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號轉導靶標。

■靈敏，準確和*的性能

■用血清、血漿、組織培養上清或裂解產物進行過驗證

■在半天內可完成的現成，方便的檢測

二、實驗原理：
    ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
三．實驗材料與試劑配制：
1.儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。
四．“雞血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒”樣品收集、處理及保存
1）.細胞培養上清：
適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2）細胞：
用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3）血清：
在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4）血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5）體液：
包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6.）組織標本：
切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
五．操作步驟：
1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。
3）標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。
注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。
4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復5 次，拍干。
7）加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。
8）溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。
11）終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。
12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。
注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內，以免影響準確性。

六.標準曲線的繪制方法：
可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA標準曲線，我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例，繪制的ELISA標準曲線如下：

七．數據計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，即為樣品的實際濃度。
八．“雞血管內皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒”注意事項：
1）實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2）加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性。
3）孵育：嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。
反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。
4）建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。
5）建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。

九.配送服務：

產品包裝：在采樣、發送、運輸過程中有保冷溫度要求的，公司均采用加厚款生物保溫箱，內裝生物冰袋，有效的控制產品溫度，保證貨物質量不受影響，同時并填充大量EPE發泡棉，具有*的緩沖彈性，它就像成千上萬的小彈簧緊緊地保護在郵寄物品周圍，它能有效的吸收嚴酷的沖擊力，使郵寄物品免于破損，保證貨物完好送達您手。

物流快遞：鑒于各快遞在全國各地承諾超配送范圍與全國行政區劃分有較大差異，以及快遞會對其配送范圍內進行不定期調整，我們目前無法實現準確定位，但我們會盡力協助您解決問題。 同時我們還為為上海市本地客戶可提供送貨上門服務，1個工作日送達。我司承諾，保障大家的貨物*時間寄送，為大家提供快速、準確、安全、優質的配送服務。