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18221656311
產品型號:Col Ⅲ
廠商性質:生產廠家
所在地:上海市
更新時間:2016-06-03
產品簡介:
品牌 | R&D/美國 |
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一、性能參數
使用前*閱讀說明書。本酶聯免疫試劑盒是基于經典酶聯夾心技術原理,只能用于研究用途,不得用于醫學診斷。
二、“豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒”工作原理
所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體,經生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應;經過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。
三、每套試劑盒中內容(96T)
材料 數量
標準品 96T(2vial)
預包被抗體的96孔板 96T(8×12)
生物素標記人ANG抗體 96T (1:100)
ABC(親和素-過氧化物酶復合物) 96T (1:100)
樣品稀釋液 96T×2
抗體稀釋液 96T×1
ABC稀釋液 96T×1
TMB顯色液A 96T×1
TMB顯色液B 96T×1
TMB終止液 96T×1
ELISA洗滌液 96T×1(1:25)
四、需要而未提供的試劑和器材
1. 37℃恒溫箱。
2. 標準規格酶標儀。
3. 自動洗板機。
4. 單通道或多通道可調節移液器以及其吸頭。
5. 蒸餾水,容量瓶等
6. 干凈的試管和Eppendof管。
五、“豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒”注意事項
1. 從-20℃取出的試劑盒,在4℃解凍guoye。盒內每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時出現的分層,否則會出現濃度不均一的現象。
2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時,切記混勻!
4. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。
5. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
6. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活!
7. 為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。
六、洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
七、樣品的準備和保存
樣品如果不立即分析,應分裝后冷凍保存,且避免反復凍融。
血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時或4℃guoye,離心1000×g 10分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞培養、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
八、樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。
九、標本的采集及保存
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃guo夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
4. 樣本處理:血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
十、操作程序
1. 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。
2. 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。
3. 酶標板加上蓋,37℃反應90分鐘。
4. 反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體;或甩去酶標板內液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5. 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
7. 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應,反應過程中,要經常的觀察,當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應zui長不要超過30分鐘)。
10. 用酶標儀在450nm測定O.D.值。
11. 根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應該×N。
十一、“豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒”計算標本待測因子含量
【特異性】: 系統和其它細胞因子無交叉反應。
【保存】: -20℃ [短期內(如兩周)可4℃
【有效期】: 12個月(-777℃)。
【用途】: 用給我留言于體外定量分析液體標本(通用型)
本試劑盒經過充分驗證,保證有效且重復性佳。歡迎我司業務員查詢價格及優惠信息。