產品型號：Lp-PL-A2

廠商性質：生產廠家

所在地：上海市

更新時間：2016-05-30

產品簡介：

您購買的兔子脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒如有質量問題，我們承諾免費包退換

試驗原理

ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。

產品規格

規格     可測樣數 標準孔 空白對照     產地 庫存

96T      85個樣    10       1         進口 現貨

48T      37個樣    10       1         進口 現貨

自備材料

1）蒸餾水。

2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3）振蕩器及磁力攪拌器等。

試劑盒組成

安全性

1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

樣品收集、處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量shengli鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。 每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物 素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3   次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

試劑盒選擇
◎衛生部規定乙肝試劑，丙肝試劑，艾滋病試劑，梅毒試劑及血型試劑必須使用經衛生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標簽的產品，試劑應從靈敏度，特異性，精密度，穩定性，簡便性，安全性及經濟性作出全面的評價。
◎靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力；2)為試劑對人群或大量樣品中陽性檢出的能力(假陰性越少越好) ，取決于包被物的全面性。
◎特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質的能力(無假陽性)，取決于包被抗原(體)及標記抗原(體)
的純度及特異性。
◎精密度：ELISA 試劑一般指其批內CV，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍試劑盒選擇
◎穩定性：試劑在規定條件下能儲存的時間，一般采用破壞性試驗即將試劑存放于37℃保存，定期測定其靈敏度，特異性和精密度等指標，直到其質量指標開始下降為止，通常認為 37℃每穩定一天相當于4-10
℃保存一個半月。
◎簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性試驗中結果判斷簡單明了，)定量試驗結果計算也應簡單。
◎安全性：指試劑對操作者和環境安全無害無傳染性。
◎經濟性：試劑在同等質量條件下通過大規模生產或技術進步降低成本而市場價格比較合理。
試劑盒評價
◎試劑評價需要有的血清考核盤( Panel)進行檢測，一般實驗室不易從生檢所或臨檢中心取得，每進一次試劑評價一次也很麻煩。可以通過間接的信息對試劑進行選擇。
◎根據該試劑生檢所批批檢定報告，了解其質量水平，按照質量計劃選擇靈敏度高的或特異性高的試劑；
◎通過詢問試劑包被物的組成，如原料來源(基因工程或合成多肽)，片段的組合(按比例混合或化學合成)，片段的長短等判斷試劑的優劣；
◎參考室間質評評價報告中對試劑的評價結果，這比較客觀公正，因為統計數字均來自各參評醫院，反映了試劑在某一地區的使用情況；
◎根據部門發布的試劑評價結果，了解市場上試劑的質量優劣。
儀器質控
為使儀器保持*工作狀態應建立維護和校正儀器的標準操作程序(SOP)，所要控制的儀器包括移液器(加樣槍)，水浴箱(溫箱)，洗板機和酶標儀。
◎移液器：ELISA 加樣量小(5-100ｕl)，其準確性直接影響實驗結果，利用稱重法檢查：吸取刻度指示量的水，萬分之一天平稱重后計算吸量是否準確，一般應在±10%以內；
◎水浴箱 經常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內)實測溫度是否*，允許有±1℃的誤差；
◎洗板機 每個廠家設置洗板后的殘留液有各自的規定一般不超過2ul ，人工扣板時，墊紙不濕，定期檢查管孔是否堵塞；
◎酶標儀 經常維護其光學部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能。
附1：酶標儀校正程序
◎濾光片波長精度檢查：將不同波長的濾光片從酶標儀上卸下，用UV-2201 型紫外-可見分光光度計(波長精度±0.3nm)于可見光區對每個濾光片進行掃描，其檢測值與標定值之差為濾光片波長精度。
◎通噵差與孔間差檢測：通道差檢測是取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑，透明，無污染以酶標板架作載體，將其(內含200ul 甲基橙溶液吸光度調至0.500A 左右)置于8 個通道的相應位置，蒸溜水調零，1 于490nm處連續測三次 ,觀察其不同通道的檢測器測量結果的*性，可用極差值來表示。孔間差的測量是選擇同
一廠家，同一批號酶標2 板條(8 條共96 孔)分別加入 200ul 甲基橙溶液(吸光度調至0.100A 左右)先后置于同一通道，蒸溜水調零,于490nm 處檢測，其誤差大小用±1.96s 衡量。n 零點飄移(穩定性觀察)：取8 只小孔杯分別置于8 個通道的相應位置，均加入200ul 蒸溜水并調零，于490nm 處每隔30 分鐘測一次，觀察各個通道4 小時內吸光度的變化。
附 1：酶標儀校正程序
◎精密度評價：每個通道3 只小杯分別加入200ul 高中低3 種不同．濃度的甲基橙溶解，蒸溜水調零，于490nm作雙份平行測定，每日測二次(上下午各一次)，連續測定 20 天。分別計算其批內精密度，日內批精密度,日間精密度和總精密度及相應的CV 值。
◎線性測定：用電子天平精確稱取甲基橙配制 5 個系列的溶液，于490nm 平行測8 次，取其均值。計算其回歸方程，相關系數及標準估計誤差 s，并用±1.96s 表示樣品測量的誤差范圍.雙波長測定評價：取一分甲基橙溶液，分別加入3 種不同濃度的溶血液(測定波長為 490nm，校正波長為585nm)，先后于8 個通道
檢測，每個通道測3 次，51 比較各組之間是否具有統計學差異，以考察雙波長消除干擾組分的效果。
◎一般酶標儀無 585nm 濾光片，可選用550nm 或630nm 濾光片。450nm 濾光片的檢定選用普魯蘭溶液(校正波長為630nm)

兔子脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒結果判斷與分析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。