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日期:2015-02-02瀏覽:645次
前言:廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中的ELISA試劑盒,有著靈敏度高、特異性強、經濟性較好等優點,于我公司購買還可以享受7.8折優惠并送新年禮物。今天是本周開始*天,上海滬鼎科普ELISA試劑盒現貨的使用。
ELISA試劑盒的種屬分類是怎樣的?常見檢測種屬有人、大鼠、小鼠、豬等。在測定時,受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應,用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
·實驗操作程序簡述
1. 準備試劑,樣品和標準品;
2. 加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘;
3. 洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘;
4. 洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應10分鐘;
5. 加入終止液;
6. 15分鐘之內度OD值;
7. 計算。
·競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
·包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置放置一個晚上,37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
·抗原和抗體
制備結合物時所用抗體一般 均為純度較高的IgG,以免在與酶聯結時其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體,這樣全部酶結合物均具有特異的免疫活性,可以在高稀釋度進行反應,實驗結果本底淺淡。如用F(ab')2進行標記,則更可避免標本中RF的干擾。在ELISA試劑盒現貨中用酶標抗原的模式不多,總的要求是抗原必須是高純度的。