宋海燕，劉 波，張駿飛，董 靜，郭 遠，劉利偉，陳從新

【摘要】 目的 探討細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）輸注聯合經動脈插管化療栓塞術（TACE）治療原發性肝癌患者延緩門靜脈癌栓形成的可能性。方法 選擇 2010 年 1 月～2014 年 12 月我院收治的原發性肝癌患者 44 例，22 例接受 TACE 聯合CIK 細胞輸注治療，另 22 例只接受 TACE 治療。采用Ficoll 兩步分離法分離外周血單個核細胞，經 IFN-γ、抗 CD3 單克隆抗體和 IL-2 誘導，使用流式細胞儀檢測細胞 CD 抗原表達鑒定 CIK 細胞培養成功， 常規行 TACE 治療，在 TACE 治療半月后輸注 CIK 細胞懸液 3 次，細胞總數為 1.0×109。治療前后行腹部 CT 檢查， 確定門靜脈栓子形成情況。結果 治療后 1 m、3 m 和 6 m，聯合組患者門靜脈癌栓發生率分別為 4.5%、13.6%和27.2%，而 TACE 組則分別為 9.0%、45.5%和 63.6%（P<0.05）；在治療 3 月時，聯合組腫瘤大小為（4.77±1.27）cm，顯著低于 TACE 組（[  5.54±1.14）cm,P＜0.05]；在治療 3 月時，聯合組血清甲胎蛋白水平為(83.14±31.91)  ng/ml，也顯著低于 TACE 組[(139.24±98.76)  ng/ml，P＜0.05]；兩組肺部、顱腦和骨骼等遠處轉移發生率無顯著性差異（P>0.05）。結論 CIK 細胞輸注聯合 TACE 可明顯減緩原發性肝癌患者門靜脈栓子形成的時間，改善肝功能，同時能有效控制腫瘤的生長及擴散。

【關鍵詞】 原發性肝癌；門靜脈癌栓；細胞因子誘導的殺傷細胞；過繼免疫療法；經動脈插管化療栓塞術

    原發性肝癌是常見的消化道惡性腫瘤。研究顯 示，原發性肝癌的發生率有明顯上升的趨勢[1]。肝癌

作者單位：230031  合肥市 第 105 醫院感染病科

作者：宋海燕，女，33 歲，主治醫師。從事肝病臨床工作

患者早期無特異性臨床表現，發現時多已發生腫瘤轉移。由于肝臟血供豐富，且為雙重血液供應，肝癌一般首先發生肝內轉移，而門靜脈栓子形成就是一種常見的類型。因癌栓形成后明顯增加了上消化道出血的風險，給進一步治療帶來難度。因此，預防癌栓形成尤為重要。對于伴有門靜脈栓子形成的肝癌患者，能耐受手術者應手術剝除治療，并可在此基礎上經肝動脈或門靜脈置管灌注化療，這是目前比較理想的治療方法。還有其它一些微創治療方案，如超聲微波消融、放療及門靜脈內置支架等。這些治療方法的共同缺點是無法防止腫瘤復發和轉移。近年來，有學者采用細胞因子誘導的殺傷細胞（Cytokine-induced  killer  cells，CIK）輸注，作為一種全身治療方法，可能會達到防止肝癌轉移或控制遠處轉移灶發展的效果[2～4]。本研究采用 CIK 輸注聯合經動脈插管化療栓塞術 (Transcatheter arterial chemoembolization, TACE) 治療原發性肝癌患者，觀察治療后門靜脈癌栓形成及肝內腫塊大小變化情況，發現該聯合治療能有效控制腫瘤生長，并明顯降低門靜脈癌栓的發生率。

    1資料與方法

1.1 一般資料 自 2010 年 1 月～2014 年 12 月我院收治的原發性肝癌患者 44 例，男性 41 例，女性 3 例；年齡 33～68 歲，平均年齡（42.6±8.3）歲。所有患者診斷符合《原發性肝癌診療規范（2011 年版）摘要》[5] 標準，不伴有門靜脈栓子，同時無 TACE 治療禁忌證者入選。在入選患者中，接受單一 TACE 治療者 22 例，另 22 例在 TACE 治療的基礎上給予靜脈輸注 CIK 細胞懸液治療。治療前，兩組患者各項指標比較均無顯著性差異。伴有門靜脈栓子或其他部位轉移者或有 TACE 治療禁忌證者被除外。

1.2CIK 細胞的分離、純化和培養  采用 Ficoll 兩步分離法分離出外周血單個核細胞，用含血清培養基調整細胞數為 1～5×106／ml，在 37℃，5%CO2培養箱中培養，于培養的第 1  d 加入終濃度為 1000U/ml 的 IFN-γ(上海滬鼎生物科技有限公司)；第 2d 加入終濃度為 100  ng/ml 抗 CD3 單克隆抗體［妙通（上海）生物科技有限公司］、1000  U/  ml 的 IL-2（上海常斤生物科技有限公司），而后每隔 1～2  d加入新鮮的含 1000 U/ml 的 IL-2 *培養液，并調細胞數為 1～5×106/ml，繼續培養、傳代，定期補充抗 CD3 和IL-2。使用流式細胞儀檢測細胞 CD 抗原的表達情況。同時取培養上清行乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、HIV 和梅毒感染標志物檢測，行細菌培養、真菌培養，檢測抗支原體 -IgG 和內毒素水平。

1.3治療方法 所有患者每月行常規 TACE 治療 1 次，治療組 22 例患者在此基礎上接受 CIK 細胞治療，即在 TACE 治療半月后輸注 CIK 細胞懸液，連續或隔日輸注 1 次，共 3 次，細胞總數為 1.0×109。

1.4檢測與檢查 常規檢測血清甲胎蛋白（Alpha fetal protein, AFP）、血清總膽紅素 (Total serum bilirubin, TBIL)、血清白蛋白(Serum albumin, Alb)和凝 血 酶 原 時 間 標 準 化 比 值（International normalized ratio, INR）等。連續觀察 6 個月。每次治療前所有患者均行肝臟增強 CT 掃描，評估腫瘤大小及轉移情況，并了解有無門靜脈癌栓形成。

1.5統計方法 應用 SPSS 17.0 軟件進行統計學處理，組間發生率的差異比較采用 x2 檢驗，兩組間生化指標和腫瘤大小的計量資料以（x依s）表示，采用不 成對樣本的 t 檢驗。P<0.05 表示差異具有統計學意義。

2結果

2.1門靜脈癌栓形成情況 在治療結束后 6 個月， 兩組患者門靜脈栓子形成情況見表 1 和圖 1。

  表 1   兩組門靜脈癌栓發生情況（%）的比較

  例數 1 m 3 m 6 m CIK 22 1（4.5） 3（13.6） 6（27.2）①

  TACE 22 2（9.0） 10（45.5） 14（63.6）淤P<0.05

 2.2療效情況 在治療后，兩組患者血清 AFP 均有不同程度的降低；在治療 3 月時，兩組間 AFP 水平差異有統計學意義（P<0.05）；在 TACE 治療后對照組腫瘤生長速度得到有效的控制，短時間內未明顯增大，治療組幾乎所有患者腫瘤都停止增大，治療 3 月時兩組間腫瘤直徑大小差異具有統計學意義

（P<0.05，表 2）。表 2 兩組血清 AFP 和腫塊大小（x依s）的比較

例數 AFP（ng/ml） 腫塊大小 (cm)

CIK 治療前         22 142.09依103.15 5.97依1.33 治療后 3 m 22 83.14依31.91淤 4.77依1.27 治療后 6 m 22 85.53依33.12于 4.12依1.65盂

TACE 治療前 22 156.23依109.58 6.37依1.37

治療 3 m 22 139.24依98.76 5.54依1.14

  治療后 6 m 21 140.03依101.13 4.95依1.34

與 TACE 組比，淤t=1.759,P=0.038；于t=1.873,P=0.027；盂t= 1.826,P=0.040

2.3肝功能的變化情況 在治療的早期，兩組肝功能指標均有輕度改善。自治療 3 月后直至隨訪結束，兩組間血清TBIL 水平差異有統計學意義（P<0.05）；血清 Alb 和 INR 指標在兩組間比較，差異均無統計學意義（P>0.05，表 3）。

  表 3  兩組血清肝功能指標（x依s）的比較 Alb（g/L） TBIL（滋mol/L） INR

治療前 治療 3 月 治療前 治療 3 月 治療前 治療 3 月治療組 37.6依5.4 35.9依10.240.6依12.9 29.5依9.9 1.23依0.08 1.24依0.06 對照組 36.9依7.8 35.4依7.5 62.7依20.850.4依22.7 1.23依0.09 1.23依0.07

t 6.216 6.164 5.896 15.265 1.431 1.386

P >0.05 >0.05 >0.05 <0.05 >0.05 > 0.05

2.4遠處轉移情況 兩組患者遠處腫瘤轉移主要發生在肺、膽管系統、胸壁、腦和腰椎，但兩組轉移發生率無顯著性差異（P>0.05，表 4）。

表 4 兩組遠處轉移發生情況（%）的比較

例數 1 m 3 m 4  m 5  m 6 m 治療組 22 0（0.0） 0（0.0）   1（4.5）  1（4.5）  2（9.0） 對照組 22 0（0.0） 1（4.5） 1（4.5） 2（9.0） 3（13.6）

3討論

CIK 細胞是新近發展起來的過繼免疫細胞。由于CIK 細胞具有增殖速度快，抗腫瘤能力強，而且在細胞的數量上能滿足臨床的需要等特點，因而臨床應用前景較好。目前，CIK 細胞輸注已廣泛應用于臨床疾病的治療[6～10]，如肝癌、結腸癌、腎癌等。大量的臨床研究資料顯示[8]，CIK 細胞輸注治療可以提高患者的免疫功能及生存質量，有助于提高療效，延長患者的生存期。目前，使用的 CIK 細胞來源有自身外周血、同種異體外周血或臍帶血等。

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