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影響抗體抗原反應(yīng)的因素有哪些
日期：2013-08-14瀏覽：1074次
客戶在做抗體抗原實(shí)驗(yàn)時(shí)，經(jīng)常會(huì)向我們技術(shù)部咨詢關(guān)于抗體抗原實(shí)驗(yàn)影響存在哪些因素，對此我司技術(shù)做出了詳細(xì)的解答，近年來隨著免疫化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，以及各種現(xiàn)代技術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用，使免疫學(xué)技術(shù)建立了許多微量、快速、特異、靈敏并能進(jìn)行自動(dòng)化檢測和數(shù)據(jù)分析處理的新方法。
抗原—抗體結(jié)合過程可分為兩個(gè)階段：*階段為特異性結(jié)合階段，此階段反應(yīng)迅速，在數(shù)秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)完成，但無可見反應(yīng)；第二階段為可見反應(yīng)階段，歷時(shí)數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)，此階段易受以下因素的影響。
1）電解質(zhì) 抗原抗體結(jié)合后由親水膠體變?yōu)槭杷z體，此時(shí)易受電解質(zhì)影響。通常在抗原抗體反應(yīng)中，以8.5g/L NaCl溶液作為抗原抗體的稀釋液及反應(yīng)液，其中Na+和Cl-可分別中和膠體顆粒上的電荷，使膠體顆粒的電勢下降，形成可見的沉淀物或凝集物。若無電解質(zhì)存在，則不出現(xiàn)可見反應(yīng)。但如果電解質(zhì)濃度過高，則會(huì)出現(xiàn)非特異性蛋白質(zhì)沉淀，即鹽析。
2）酸堿度 pH過高或過低都可影響抗原和抗體的理化性質(zhì)。例如，當(dāng)pH為3左右時(shí)，可出現(xiàn)非特異性酸凝集。此時(shí)因接近細(xì)菌抗原的等電點(diǎn)，細(xì)菌表面蛋白或其他基團(tuán)所帶的電荷消失，其間互相的排斥力喪失而導(dǎo)致凝集，影響試驗(yàn)的可靠性。抗原抗體反應(yīng)一般以pH6～pH9為宜。
3）溫度 抗原抗體反應(yīng)zui適溫度為37℃。一般在15℃～40℃范圍內(nèi)進(jìn)行，在此范圍內(nèi)，溫度越高，分子運(yùn)動(dòng)速度加快，增加抗原抗體接觸機(jī)會(huì)，反應(yīng)速度越快，但亦容易引起復(fù)合物解離;溫度越低，反應(yīng)速度緩慢，但抗原抗體結(jié)合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反應(yīng)需要特定的溫度，如冷凝集素在4℃時(shí)與紅細(xì)胞結(jié)合，20℃以上反而解離。
適當(dāng)?shù)臏囟瓤稍黾涌乖c抗體分子碰撞的機(jī)會(huì)，加快二者結(jié)合的速度。抗體抗原反應(yīng)的zui適溫度為37℃。
此外，適當(dāng)振蕩或攪拌也可促進(jìn)抗原—抗體分子的接觸，提高結(jié)合速度。
根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分因素，可將抗原—抗體反應(yīng)分為凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體參與的反應(yīng)、采用標(biāo)記物的抗原—抗體反應(yīng)等。
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