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革蘭氏染色法的基本原理

日期:2024-08-01瀏覽:149次

一、革蘭氏染色原理:

 

       通過結晶紫初染和碘液媒染后,在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯致密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的衡行外膜迅備拍速溶解,薄而松散的肽聚糖網不仿攔羨能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

 

二、革蘭氏染色步驟:

 

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法:


1)涂片固定。

 

2)草酸銨結晶紫染1分鐘。

 

3)自來水沖洗。

 

4)加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。

 

5)水洗,用吸水紙吸去水分。

 

6)加95%酒精數滴,并輕輕搖動進行脫色,20秒后水洗,吸去水分。

 

7)蕃紅梁色液(稀)染2分鐘后,自來水沖洗。干燥,鏡檢。

 

?    革蘭氏染色需用四種不同的溶液:堿性染料初染、媒染、脫色和復染。堿性染料初染液用于革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫。媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,以某種方式幫助染料固定在細胞上,使其不易脫落,碘是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同類型的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95%的酒精。復染液也是一種堿性染料,其顏色不同于初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同于初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,從而將細胞區分成G+和G-兩大類群,常用的復染液是番紅。

 

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