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日期:2022-11-03瀏覽:449次
【預期用途】
僅供科研使用,用于檢測血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清液等相關樣本中甲型流感病毒抗體(Flu A-Ab)的表達。
【檢測原理】
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中甲型流感病毒抗體(Flu A-Ab)表達。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中甲型流感病毒抗體(Flu A-Ab)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中甲型流感病毒抗體(Flu A-Ab)的存在與否。
【操作步驟】
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)。
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10-20分鐘。
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
【注意事項】
1. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
2. 為免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和試管。
3. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
4. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm。
5. 顯色時間供參考,因用戶實驗室條件差異,最佳顯色時間會有所不同。
6. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
7. 本試劑不同批號組分不得混用。
8. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。
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