因此在ELISA試劑盒測定中試劑的預備wei樞紐的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。加血清樣本及反應試劑在現在的ELISA試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。溫育是ELISA測定中影響測定成敗wei樞紐的一個因素。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易泛起重復滴加或加在兩孔之間的現象，這樣就會在孔內的非包被區泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。

    如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發性方式開釋，因此，在測定此類激素時，ELISA試劑盒要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度，以知足測定要求。再如治療藥物的檢測，應根據藥代動力學選擇服藥后的適時間抽血檢測。

    溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，ELISA試劑盒不可濺出和產氣憤泡。對用于激素和治療藥物測定，要留意收集時間甚或體位有可能會對測定結果產生影響。