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2013-04-12
技術指導ELISA試劑盒包被方式將抗原或抗體固定在過程稱為包被（coating）。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結多發(fā)生...2013-04-09
ELISA試劑盒酶標記抗體的制備酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。（1）戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團試劑，它可以使酶與蛋白質的氨基通過它而聯(lián)結。堿性磷酸一般用此法進行標記。交聯(lián)方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中，反應后即得酶標記抗體。ELISA中常用的酶一般都用此法交聯(lián)。它具有操作簡便、有效（結合率達60%-70%）和重復性好等優(yōu)點。缺點是交聯(lián)反應是隨機的，酶與抗體交聯(lián)時分子間的比例不嚴格，結合物的大小也不均...2013-04-01
簡述成人胰腺消化、胰島分離方法：尸體胰腺原位灌洗后置UW液中，4℃保存運輸。到實驗室后在4℃Euro-Collins液中清除非胰組織，從胰管內插入穿刺針，絲線縫扎后用注射器灌注Liberase酶溶液（1.5mg/ml）。胰腺充分膨脹后將胰腺切片，置消化罐中并放入數(shù)顆玻璃珠，加500μm孔徑的不銹鋼絲網，旋緊罐蓋。開啟蠕動泵將剩余的Liberase酶溶液泵入罐內，控制罐內溫度37℃，手動振搖消化罐循環(huán)消化，于10分鐘后開始取樣鏡檢，待大部分胰島分離后用冷的含10%胎牛血清（FB...2013-03-29
如何選擇陽性對照？陽性對照即是100%出現(xiàn)該結果的“實驗”組，材料是確定的；陰性對照則是肯定不會出現(xiàn)結果的“實驗組”，材料也是確定的；之所以加引號，是因為除了實驗需要驗證的變量，其他條件全部都是一樣的，用來排除其他實驗情況對結果產生的影響。例如，驗證一轉基因玉米是否有抗藥性，需要選擇同種的轉基因成功的抗藥玉米做陽性對照，無轉基因的做陰性對照，從而保證除了該基因其他條件一致；一個成功的實驗，通常情況下必須有陽性對照和陰性對照排除其他干擾情況如果您需要合適的陽性對照，請核查數(shù)據(jù)表...2013-03-27
干擾素（IFN）是一種廣譜抗病毒劑，并不直接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制乙肝病毒的復制；同時還可增強自然殺傷細胞（NK細胞）、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節(jié)作用，并增強抗病毒能力。干擾素是一組具有多種功能的活性蛋白質（主要是糖蛋白），是一種由單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子。它們在同種細胞上具有廣譜的抗病毒、影響細胞生長，以及分化、調節(jié)免疫功能等多種生物活性。實驗步驟1.制備誘生劑：采用NDVF系弱毒株，以雞胚尿囊液...2013-03-25
ELISA雙抗體夾心法及間接法的正確操作步驟elisa試劑盒原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或...